使綠螢光能活體標記於類心臟之DNA新組合及其製備的方法
  ‧ 專利名稱 使綠螢光能活體標記於類心臟之DNA新組合及其製備的方法
  ‧ 專利證書號 I 245799
  ‧ 專利權人 國立臺灣大學
  ‧ 專利國家
    (申請日)
中華民國 (2002/01/17)
  ‧ 發明人 蔡懷楨, 黃秋茹, 蕭崇德,
 
技術摘要:
本發明提供一種使魚類心臟能專一性發螢光之技術,以作為日後研究心臟相關基因與功能,以及進行藥物篩選與基因治療之材料及其相關方法。此方法包括了將含有螢光蛋白基因的DNA組合片段轉殖進入魚類染色體,以在魚類心臟中具有專一性之螢光表現。其中,此轉殖程序至少包含了下列步驟:首先將魚類之染色體DNA抽取出來,並利用限制酵素進行剪切;接著再接合適當的適應子,進行二次的聚合脢連鎖反應,以放大目標DNA片段。此經過放大的DNA片段經過定序步驟,確認其為魚類第二類心臟肌凝蛋白輕鏈(cardiac myosin light chain 2, cmlc2)基因後,接著建構一表現質體。此質體包含了魚類第二類心臟肌凝蛋白輕鏈基因上游調控序列(upstream regulatory region)、部分結構序列、螢光蛋白的cDNA以及在這整個組合序列兩端所接上之腺聯病毒(adeno- associated virus)末端重複序列(inverted terminal repeats)。最後,將線性化後之質體經顯微注射而轉殖進入魚類受精卵中並繼續培養,然後在螢光顯微鏡下觀察,可篩選到能在心臟具有專一性發螢光,且繼代穩定遺傳此特性之轉殖動物品系。



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