|
|
 醫學檢驗暨生物技術學系 -
李君男
|
|
專業技術：
病毒學、病毒疫苗及分子檢驗試劑研發 |
| 研究介紹 |
| |
◎研究主題 |
| |
本實驗室之研究主題近年來著重於病毒疫苗的發展，利用DNA、腺病毒及其他微生物當做表現病毒蛋白質的載體，以研發病毒的疫苗；另亦擬發展反轉遺傳系統，以研究病毒基因之功能與RNA病毒的疫苗。此外，病毒檢驗試劑之研發亦是目前研究主題之一。
以下列出部分過去的研究及成果。
一、 病毒疫苗的研究：
流行性感冒病毒方面：以保守性較高之M2蛋白質進行發展DNA疫苗。構築M2蛋白質與修飾過之M2蛋白質之DNA載體，結果經剔除穿膜部份之M2蛋白質可以成功的在大腸桿菌中表現蛋白質，並經M2單株抗體確認。小鼠之免疫實驗，以肌內方式注射帶有M2蛋白質基因之質體，結果顯示帶有全長的M2蛋白質基因可以刺激小鼠產生抗體反應，而經剔除穿膜部份之M2蛋白質基因卻未見此抗體反應。在體外之細胞實驗中，亦有相類似的結果，僅有全長的M2蛋白質基因會成功的於細胞中表現M2蛋白質。因此，另將剔除穿膜部份之M2蛋白質基因加以修飾，其兩端分別加上訊號胜太與Fc片段之序列，期以增強免疫反應，結果顯示確有增強免疫反應的效果。此外，免疫小鼠亦同時加入IL-5或GMCSF基因之質體，發現IL-5可增強免疫反應的效果，而GMCSF則不然。
輪狀病毒方面：輪狀病毒是引起小兒急性腸胃炎的主要病原之一，其表面蛋白質之基因變異性或抗原性之差異較大，相較之下， 位於中層蛋白殼的VP6蛋白質及穿膜的非結構性蛋白質NSP4，變化則較小。因此以VP6及NSP4蛋白質為目標，將它們的基因或經修飾過後擇殖於DNA質體及腺病毒載體中，做為表現蛋白質及免疫小鼠之用，比較蛋白質與重組腺病毒之免疫反應，研究影響疫苗效果的各種因素(例如細胞激素佐劑、黏膜佐劑)。同時測試疫苗以不同的傳送系統，特別是鼻腔注射與口腔服用的方式之保護效果。
二、 檢驗試劑之研發：
利用一些新的技術如Real-time PCR、 LAMP等，發展病毒之檢驗試劑，進行CMV、EBV、BKV、JCV及肝炎病毒等之偵測與定量，已獲得頗佳的結果。
三、 病毒之分子流行病學
輪狀病毒方面：輪狀病毒含有11個片段之雙股RNA，由電泳分析其RNA可分辨不同的病毒﹔而血清型與中和抗體有關，由病毒之外殼蛋白質所決定，其中以VP7(G)血清型為主，另一為VP4(P)血清型。自1981年以來本人實驗室搜集了逾千個輪狀病毒的檢體，已完整分析病毒之電泳型及以RT-PCR試驗完成與血清型相當之G與P基因型鑑定。由這些研究結果得以了解台灣地區各年代流行之輪狀病毒之間的關係，以及屬於那些血清型或基因型，藉此對於未來採用輪狀病毒疫苗將有所依據，有直接應用的價值。
分子演化之研究：為了解本地輪狀病毒分子演化的情形，進行基因之種系分析，已完成四種主要的G血清型(G1-G4)與2000年開始出現的G9血清型之VP7基因之種系分析，分別比較各型內具有不同電泳型輪狀病毒之VP7基因序列，經種系分析而了解各次流行輪狀病毒之間的關係或變化，此有助於了解病毒可能之來源而有助於控制病毒的流行及擴散。這些研究使我們能更清楚的了解台灣地區輪狀病毒感染之分子流行病學。
輪狀病毒分子演化的機制，除了點的突變外，另一常發生者為基因重組，我們已陸續發現多種重組病毒，並已進行基因分析。其中一個例子即為造成1993年大流行的G2P[4]輪狀病毒，與不同年代的G2P[4]輪狀病毒進行RNA雜交實驗，並進行VP7與VP1基因的種系分析，發現此病毒是一種重組病毒。此輪狀病毒與澳洲的一種重組病毒(G2P[8])具有相似的VP7基因，故在兩國之間所流行的病毒極可能有一些共同的病毒存在。
愛滋病毒(HIV-1) 之基因變異性與亞型分析：針對台灣地區流行之HIV-1進行基因變異性研究，曾分析gag、env或vpu等基因之核酸序列。經分析逾千位感染者所帶之病毒，顯示台灣地區亞型種類多，並且發現有數種重組病毒之存在，此反應出台灣地區HIV-1流行病學之複雜性。 |
| |
|
| |
|
| 專利授權區 |
|
| |
|
| |
|
| 可交易技術 |
|
| |
|
|
專利行銷平台